一、 操作室厭氧環境形成

1.按使用要求放置好必要的配件和器具，并向操作室內放入二個無毒塑料袋。

2.通電源開照明燈，開控溫儀，調節所需溫度及安全溫度。

3.操作室內放入1000g鈀粒（封閉）和500g干燥劑,并放入美蘭指示劑（封閉）。

4.關緊取樣室內外門，并抽真空校驗。

5.操作室內**次置換（氮氣置換）：

（1）先用橡皮管插入操作室內進氣口，另一頭插入塑料袋。

（2）接通氮氣進氣路，打開氮氣控制閥，使二只塑料袋充足氮氣，然后扎緊袋口。

（3）把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊。

（4）把塑料袋內氮氣漸漸地放于操作室內，**全部放出。

6.操作室第二次置換（氮氣置換）重復一 次充氮過程，并注意隨時用腳踏開關開閉排氣。

7.操作室第三次置換（混合氣體置換）：

（混合氣體配比為：N2:H2:CO2=85%:10%:5%）

（1）調換氣路打開混合氣道通閥門進氣，充氣時要隨時腳踏開關開閉排氣。

（2）混合氣充滿塑料袋后，關掉混合氣直通閥（三通閥），使混合氣經過流量計輸入操作并調整流量計，流量為每分鐘10毫升左右。

（3）把塑料袋內混合氣漸漸排于操作室內。

（4）通過三次換氣后，操作室內氣體含氧量已處于極微量狀態。

8.操作室內打開鈀粒除氧劑，接通除氧催化器電源進行催化除氧，一 小時后打開美蘭指示劑（美蘭安瓶）觀察其變色情況，不變色為操作室內達到厭氧環境。

9.開紫外線滅菌燈，室內進行滅菌處理。滅菌時間自定。

二、 菌種的置入和培養

1.檢查取樣室內門并關緊。

2.打開取樣室外門，將菌種放入取樣室后即關上外門。

3.取樣室充氮置換三次過程：先抽真空度500毫米汞柱（66Kpa）以上停,然后人工打開氮氣閥門進氣,使指針回復零位后進行下次操作。

4.如選定真空度較低就需要增加置換的次數。

5.取樣室內外門開啟，關緊要抽低真空度100毫米汞柱（13Kpa）檢驗及幫助操作。

6.厭氧培養箱需要長期連續使用的條件：

（1）每天在操作室內打開美蘭指示劑觀察，正常情況下使用。如不正常就必須重新換氣。

（2）要長期連續輸入微量的混合氣體，使補進的氫氣能和微量的氧結合通過催化吸收，保證了室內厭氧狀態，補入混合氣流量選定為每分鐘10毫升左右。

（3）連續培養運行一 天，更換一 次除氧劑和干燥劑。

7.接種棒滅菌器的應用：

（1）隨時用鎳鉻電熱絲使電極短路而變赤熱以進行殺菌（接種棒）

（2）熔蠟處可直接放上，試管封蠟口旋轉熔蠟。

8.操作室里的培養箱內的溫度可任意選擇和控制。

9.混合氣瓶、氮氣瓶輸出壓力調整：調節減壓閥，使輸出壓力為0.1Mpa左右。