這是關(guān)于細胞培養(yǎng)污染的三部分系列的第二部分。
正如在這個三部分文章系列的**部分中提到的，生物污染是每個細胞培養(yǎng)實驗室的一個嚴(yán)重問題。由于對結(jié)果數(shù)據(jù)的可靠性有影響，因此將污染的發(fā)生保持在****低限度是**關(guān)重要的。討論了污染的常見來源，在這里我們看看二氧化碳培養(yǎng)箱的使用及其在提供安全環(huán)境中的作用，沒有任何潛在的污染微生物。
細胞培養(yǎng)依賴于使用培養(yǎng)箱來維持保持細胞存活的正確條件。二氧化碳專門用于模擬哺乳動物的生理條件。因此，培養(yǎng)箱將細胞所需的元件結(jié)合：37℃（98.6°F）的穩(wěn)定溫度，7.4**7.6的受控pH，與受控的CO 2水平和95％的高相對濕度平衡。不幸的是，哺乳動物細胞的理想環(huán)境也為我們身體內(nèi)和身上的正常菌群的一系列生物污染物提供了理想的環(huán)境。這就是為什么理解良好的實驗室實踐以及如何選擇合適的設(shè)備可以幫助減少污染是如此重要。某些CO2培養(yǎng)箱，例如，
正確：良好的實驗室規(guī)范
良好的實驗室操作是防止污染的**有效的方法。穿著一件帶有彈性袖帶的實驗室外套，覆蓋街頭衣服，在開始任何細胞工作和戴一次性手套之前徹底洗手，工人可以大大降低潛在的污染。盡可能多地，文化主義者還應(yīng)避免接觸門把手，電話，計算器等物品; 避免佩戴shou飾; 并綁回長長的頭發(fā)。任何患有感冒或其他呼吸道感染的人應(yīng)戴口罩，以盡量減少感染的潛在傳播。
冰箱，冷凍箱，儲物柜和長凳的工作區(qū)域和頂部應(yīng)保持清潔，整潔，無灰塵。地板應(yīng)定期清潔，特別是角落，以減少灰塵和污垢，由于交通在房間里的流通。此外，應(yīng)清潔實驗室設(shè)備（例如，機械移液器，渦流，水浴，離心機），并定期檢查污染跡象。沒有適當(dāng)?shù)臒o菌技術(shù)的替代品。文化和媒體應(yīng)只在生物安全柜中打開，不應(yīng)由人員共享。常見的污染途徑是當(dāng)培養(yǎng)基液滴保留在培養(yǎng)容器和其蓋子之間或培養(yǎng)基瓶的頸部上時形成的液體“橋”進入。
二氧化碳培養(yǎng)箱作為培養(yǎng)細胞的家，是必須保持良好實驗室操作的關(guān)鍵點。記住，哺乳動物細胞的**環(huán)境也是微生物伴侶的誘人環(huán)境。由于任何培養(yǎng)箱污染物的進入路徑是通過敞開的門，需要建立一個將門開口保持**小的工作系統(tǒng)。嘗試限制共享培養(yǎng)箱的人數(shù)，以減少污染源。設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)和定期清潔程序（每周或每月），并立即使用70％酒精清除任何溢出物。
培養(yǎng)箱設(shè)計：保持污染檢查
二氧化碳培養(yǎng)箱的設(shè)計可以是減少生物制劑污染的重要因素。有許多有用的功能，簡化清潔，并提供持續(xù)保護，防止日常使用中的污染。這些能力區(qū)分培養(yǎng)箱的選擇，重要的是認(rèn)識到不同制造商的類似選項不一定提供相同的結(jié)果。
容易清洗
當(dāng)孵育器易于清潔并且具有**小的內(nèi)表面時，可以顯著地控制微生物的存在。具有圓角的培養(yǎng)箱消除了裂縫和邊緣，微生物可以隱藏和繁榮。電拋光的表面去除微小的凹陷，否則這些微小的凹陷將用作細菌的隱藏孔。
清潔培養(yǎng)箱時有幾個好的規(guī)則：
如果存在水盤，向水中添加安全的抗微生物劑是一個好主意。在平底鍋中使用蒸餾水，每周更換一次。在整個清潔過程中一定要戴手套和實驗室外套，以盡量減少引入新的污染生物體。
高溫消毒
在一些培養(yǎng)箱上可用的方便的選擇是自動化高干熱或濕熱消毒循環(huán)。大多數(shù)這些設(shè)計為用空培養(yǎng)箱運行過夜。高熱消毒提供了一個有效的方法，以確保培養(yǎng)箱的內(nèi)部沒有細菌，當(dāng)你的細胞**進入培養(yǎng)箱在一個清潔周期后。有不同的制造商提供不同的選擇，但不是所有這些都同樣有效，2,3和用戶應(yīng)該決定哪個選項**適合他們的需求。
雖然消毒循環(huán)不能消除對常規(guī)清潔培養(yǎng)箱的需要，但它可以消除對單獨高壓滅菌內(nèi)部部件的需要，并消除“駐留”污染的風(fēng)險。
空氣過濾
一些CO2培養(yǎng)箱上的一個常見功能是HEPA過濾器，其將過濾內(nèi)部空氣，去除微生物，微粒，氣溶膠，甚**在一些情況下，揮發(fā)性有機化學(xué)品。100級HEPA過濾器應(yīng)能快速提供潔凈室空氣質(zhì)量，以便消除通過門進入的任何污染物。
考慮在開門之后獲得**大空氣質(zhì)量所需的時間，特別是如果頻繁的門開啟是不可避免的。此恢復(fù)時間可能因制造商而異。4 HEPA過濾器需要少量維護，但應(yīng)定期更換（即每六個月）以獲得**佳效果。
抗菌表面
歷史上，銅已被用作控制微生物污染的方法，包括細菌，病毒和真菌的微生物污染。包括阿茲臺克人，希臘人和羅馬人在內(nèi)的古代文明使用銅作為皮膚病和傷口的局部治療，5長期以來，銅管已被安全地用于儲存水和其他食物。銅可以鈍化酶并損傷細胞中的蛋白質(zhì)，因為Cu 2+離子穿透細胞膜的孔并與酶的-SH基團反應(yīng)，從而改變蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。不銹鋼和鋁不抑制微生物的壽命，并且具有**小銅含量的合金顯示更少的益處。抗菌效果與所用銅的量和質(zhì)量直接相關(guān)。純銅已被證明是**有效的抗菌表面材料，具有在僅1.5小時內(nèi)滅活耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的能力。含有較少銅的合金，例如黃銅，顯示出非常慢的響應(yīng)和總體上相當(dāng)?shù)偷目刮⑸镄Ч?
一些二氧化碳培養(yǎng)箱提供了銅內(nèi)部的選擇以抑制當(dāng)門打開時可能進入培養(yǎng)箱的任何細菌的生長。如上所述，只有100％的純銅將在幾分鐘內(nèi)有效地消除微生物污染物。固體銅中的Cu 2+離子不會變成空氣傳播，因此培養(yǎng)皿和燒瓶中的培養(yǎng)物沒有風(fēng)險。這是在細胞培養(yǎng)培養(yǎng)箱中具有連續(xù)抗微生物保護的偉大方式，其將持續(xù)培養(yǎng)箱的壽命，同時需要**小的維護。加利福尼亞生殖實驗室的Imam El-Danasouri，一個長期使用銅襯的培養(yǎng)箱，解釋說：“...銅培養(yǎng)箱減少加濕水或培養(yǎng)箱壁上感染的可能性。” 6
防護外部環(huán)境
大多數(shù)培養(yǎng)箱都有一個固體玻璃內(nèi)門，以保護樣品免于意外暴露于外部環(huán)境。分開的氣密內(nèi)門將進一步有助于**小化在門打開之后的暴露和速度恢復(fù)**設(shè)定條件。這個分開的內(nèi)門可以提供三個或六個單獨的較小的門，其允許進入培養(yǎng)箱的特定部分而不干擾其他區(qū)域。分隔的內(nèi)門減少了微生物進入培養(yǎng)箱的任何機會，并使來自培養(yǎng)箱的熱，大氣和濕度的損失**小化。
外部水源
生命需要水，當(dāng)然包括微生物。雖然他們喜歡在CO2培養(yǎng)箱內(nèi)溫暖，潮濕的氣氛，水盤是特別邀請。通常將抗菌化合物，銅線甚**硬幣加到水盤中。具有**應(yīng)用或特別有價值的樣品的實驗室也可以考慮將加濕器水源移動到培養(yǎng)箱外部的培養(yǎng)箱設(shè)計，從而完全從培養(yǎng)箱內(nèi)部去除這種污染源。
結(jié)論：戰(zhàn)斗一場勝利的戰(zhàn)斗
細胞培養(yǎng)物的生物污染是每個細胞培養(yǎng)使用者的偶然問題。污染每年花費數(shù)百萬美元的時間和材料損失，否則可能花費在研究和開發(fā)上。雖然細胞培養(yǎng)物污染不能完全消除，因為微生物是我們的恒定伴侶，可以實施精細控制的過程以減少發(fā)作的影響。良好的無菌技術(shù)，清潔的實驗室和對污染途徑的了解，包括進入二氧化碳培養(yǎng)箱本身是**關(guān)重要的。二氧化碳培養(yǎng)箱的制造商是該過程的合作伙伴，現(xiàn)在提供許多選項，幫助**小化培養(yǎng)箱的污染。
在本系列的第三篇和**后一篇文章中，我們將介紹這里提到的預(yù)防措施和技術(shù)，使您能夠自信地保持無污染的文化環(huán)境。
